Hybridation in situ
Principe
L'hybridation in situ (ISH) est une technique de biologie moléculaire permettant de marquer spécifiquement de l'acide nucléique qui peut être de l'ADN ou de l'ARN sur des coupes de tissu. Cette technique est basée sur l'utilisation d'une sonde couplée à un marqueur, pouvant s'hybrider par complémentarité sur un site d'intérêt.
Il existe principalement deux techniques d'hybridation in situ: la Fluorescence in situ hybridization (FISH) et la Chromogenic in situ hybridization (CISH). Dans le cas de la FISH, la révélation se fait par fluorescence en utilisant soit un marqueur fluorescent, soit un marqueur possédant un site antigénique reconnaissable par un anticorps couplé à un fluorophore. L'observation est réalisée grâce à un microscope à fluorescence.
La CISH utilise quant à elle des anticorps couplés à un agent coloré, dirigés contre la sonde. L'observation nécessite un microscope à fond clair.
Applications
De part sa très forte sensibilité, l’hybridation in situ permet de cibler aussi bien des pathogènes que des anomalies génétiques et ou chromosomiques là où le marquage immunologique des protéines trouve ses limites. Elle est notamment utilisée en diagnostic prénatal ou pour le dépistage de cancers et autres pathologies.
Maitrise des points critiques
La technique d'ISH nécessite de maitriser parfaitement chacune des étapes des protocoles de préparation des échantillons et de coloration des tissus par hybridation et immunomarquage afin d'obtenir des résultats de qualité reproductible. Grâce à une totale automatisation de ces protocoles et à un système de management de la qualité accrédité par le COFRAC, HISTALIM est à même de garantir une grande maitrise des couples temps / température des échantillons comme des réactifs.